Wnt-3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401936-ACT

WNT3 codifica a Wnt-3, uma glicoproteína secretada que atua como um morfógeno-chave na sinalização canônica Wnt/β-catenina e em programas de desenvolvimento relacionados. Ao interagir com os receptores Frizzled/LRP, a Wnt-3 promove a estabilização da β-catenina e a regulação transcricional de genes que controlam proliferação, especificação do destino celular, polaridade e padronização tecidual. A desregulação da sinalização de WNT3 está associada a estados de diferenciação alterados e a controle anômalo do crescimento em diversos contextos de doença, incluindo ativação de vias oncogênicas e fenótipos congênitos do desenvolvimento. Na pesquisa biomédica, a Wnt-3 é comumente estudada para investigar a comunicação entre vias (crosstalk) com redes transcricionais TCF/LEF, estados celulares semelhantes a células-tronco e programas epitélio–mesênquima.

Wnt-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-3 em células tumorais com expressão de WNT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.