Plásmido CRISPR de Activación (h) Wnt-3: sc-401936-ACT

WNT3 codifica la proteína Wnt-3, una glicoproteína secretada que actúa como un morfógeno clave en la señalización canónica Wnt/β-catenina y en programas de desarrollo relacionados. Al unirse a los receptores Frizzled/LRP, Wnt-3 favorece la estabilización de β-catenina y la regulación transcripcional de genes que controlan la proliferación, la especificación del destino celular, la polaridad y el patrón tisular. La desregulación de la señalización de WNT3 se asocia con estados de diferenciación alterados y un control anómalo del crecimiento en múltiples contextos patológicos, incluida la activación de vías oncogénicas y fenotipos congénitos del desarrollo. En investigación biomédica, Wnt-3 se estudia con frecuencia para analizar el entrecruzamiento de vías con redes transcripcionales TCF/LEF, estados celulares de tipo madre y programas epitelio–mesénquima.

Wnt-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de WNT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Wnt-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus WNT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional WNT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Wnt-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo WNT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Wnt-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Wnt-3 en células tumorales con expresión de WNT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.