Wnt-15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406368

概要

WNT9Bは、分泌性糖タンパク質であるWnt-15をコードしており、Wntシグナル伝達を活性化するリガンドとして、発生過程における細胞運命の決定、増殖、極性、ならびに組織パターニングの制御に関与します。Wnt-15はFrizzled受容体および共受容体との相互作用を介して、β-カテニン依存性の転写プログラムに加え、細胞骨格ダイナミクスや方向性移動を制御する非カノニカル経路にも影響を及ぼし得ます。WNT9Bの活性は、器官形成を形作るモルフォゲン勾配に関与するとされ、Wntシグナルの制御異常は先天異常や腫瘍形成過程と広く関連づけられています。ヒト細胞モデルにおいてWNT9Bは、増殖因子シグナルや分化を司る転写ネットワークとの経路間クロストークを解析するための、扱いやすい入口となります。

Wnt-15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるWNT9B遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、WNT9B内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、WNT9Bのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Wnt-15タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Wnt-15シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、WNT9B欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Wnt-15の機能に不可欠なWNT9Bエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、WNT9Bゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Wnt-15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびWnt-15 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、WNT9B遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Wnt-15 HDRプラスミド（h）および Wnt-15 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはWNT9Bホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のWNT9B標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。