WISP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402559-ACT

WISP1 codifica WISP-1 (WNT1-inducible signaling pathway protein 1/CCN4), una proteina matricellulare secreta che modula le interazioni cellula–matrice, l’adesione e la migrazione. In quanto membro della famiglia CCN, WISP-1 integra il rimodellamento della matrice extracellulare con la segnalazione mediata da fattori di crescita e integrine, ed è spesso studiata nel contesto di programmi trascrizionali guidati da Wnt/β-catenina. Tra le funzioni riportate vi sono la regolazione dell’attivazione dei fibroblasti, i processi osteogenici e condrogenici e la segnalazione pro-sopravvivenza nei compartimenti stromali ed epiteliali. Un’espressione alterata di WISP1 è stata associata a fibrosi tissutale, riparazione anomala delle ferite e rimodellamento del microambiente tumorale, rendendola rilevante per studi meccanicistici su invasione, angiogenesi e dinamiche della matrice extracellulare.

WISP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WISP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

WISP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WISP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WISP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di WISP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WISP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da WISP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via WISP-1 nelle cellule tumorali con espressione di WISP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.