WDR82 Double Nickaseプラスミド (h): sc-406963-NIC

ヒトWDR82は、転写とクロマチン状態を制御する核内複合体において、調節性アダプターとして機能するWDリピート含有タンパク質をコードしています。WDR82は特に、RNAポリメラーゼIIのC末端ドメイン（CTD）のリン酸化状態を、H3K4メチル化装置を含むヒストン修飾活性のリクルートと結び付ける因子としてよく知られており、その結果、プロモーター近傍での遺伝子制御に影響を与えます。これらの役割を通じて、細胞周期や分化といった状況にわたって遺伝子発現プログラムを統合する経路において、RNAプロセシングおよび転写の忠実性に寄与します。WDR82に関連するクロマチンおよび転写制御の破綻は、がん生物学をはじめ、異常なエピジェネティック制御に結び付く他の疾患においても検討されています。

WDR82 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における WDR82 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、WDR82内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、WDR82の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、WDR82が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。