WDR5 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m2): sc-431247-LAC-2

O gene Wdr5 em camundongos codifica a WDR5, uma proteína estrutural conservada com repetições WD40 que atua como componente central dos complexos metiltransferases de histona H3K4 da família SET/MLL e coordena fatores de montagem associados à cromatina para regular programas transcricionais. A WDR5 sustenta o controle epigenético da expressão gênica por meio da regulação de promotores e enhancers, influenciando a progressão do ciclo celular, a especificação de linhagens e o padrão de desenvolvimento, além de se integrar a redes mais amplas de remodelamento de cromatina e processamento de RNA. Estados de cromatina dependentes de WDR5 desregulados estão ligados a alterações de diferenciação e a fenótipos proliferativos observados no câncer e em outros distúrbios de base epigenética, o que torna o Wdr5 um alvo valioso para estudos mecanísticos da regulação transcricional. A edição gênica de Wdr5 em modelos murinos permite a dissecação funcional das vias de metilação de H3K4, o mapeamento de interações proteína–proteína dentro dos complexos COMPASS/MLL e a investigação de efeitos específicos de contexto sobre a biologia de células-tronco e a homeostase tecidual.

As Partículas de Ativação Lentivirais WDR5 (m2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Wdr5 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais WDR5 (m2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Wdr5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de WDR5. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Wdr5 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.