WDR5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m2): sc-431247-ACT-2

O gene Wdr5 de camundongo codifica a proteína 5 contendo repetições WD (WDR5), uma plataforma conservada associada à cromatina que se liga às caudas da histona H3 e organiza os complexos SET1/MLL para promover a metilação de H3K4 e a ativação transcricional. A WDR5 coordena a regulação epigenética de programas de expressão gênica que controlam o desenvolvimento embrionário, a especificação do destino celular e a proliferação, por meio da modulação de estados de promotores e enhancers. A desregulação do remodelamento de cromatina dependente de WDR5 e da metilação de H3K4 tem sido associada a redes transcricionais aberrantes relevantes para a transformação oncogênica e para distúrbios do desenvolvimento, tornando-a um alvo útil para dissecar mecanismos de doença impulsionados pelo epigenoma. A edição gênica de Wdr5 em modelos murinos sustenta estudos sobre a montagem de complexos de cromatina, circuitos transcricionais e genômica funcional em sistemas celulares relevantes para diferenciação e doença.

WDR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Wdr5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

WDR5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Wdr5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Wdr5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de WDR5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Wdr5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de WDR5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via WDR5 em células tumorais com expressão de Wdr5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.