Partículas Lentivirales de Activación (h) WDR20: sc-418266-LAC

WDR20 codifica una proteína andamiaje con repeticiones WD que actúa como cofactor regulador de complejos enzimáticos desubiquitinantes, ayudando a coordinar el control dependiente de ubiquitina de la estabilidad proteica y la señalización. Mediante la modulación de la desubiquitinación, WDR20 influye en la proteostasis celular y en la dinámica de vías relacionadas con el crecimiento celular, las respuestas al estrés y los programas transcripcionales. La perturbación de redes de señalización de ubiquitina en las que participa WDR20 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis celular y es relevante para la biología de enfermedades en las que la regulación mediada por ubiquitina está alterada, incluidos contextos de transformación maligna y disfunción neurobiológica. Por ello, WDR20 es un nodo útil para analizar cómo la desubiquitinación ajusta la salida de las vías y el recambio de proteínas en células humanas.

Las partículas de activación lentiviral WDR20 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de WDR20 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral WDR20 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción WDR20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de WDR20. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo WDR20 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.