VSTM2L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414330-ACT

VSTM2L (V-set and transmembrane domain containing 2 like) codifica uma proteína associada à membrana com um domínio do tipo imunoglobulina V-set, enriquecida em tecidos neurais e implicada na comunicação célula–célula e na sinalização extracelular. Padrões de expressão relatados e estudos funcionais associam o VSTM2L à diferenciação neuronal e a processos sinápticos, sugerindo papéis na regulação de programas do neurodesenvolvimento e da atividade de redes neuronais. Como fator associado à superfície/secretado, o VSTM2L é frequentemente investigado em vias que governam a sinalização intercelular, a regulação transcricional a jusante de sinais mediados por receptores e a expressão gênica específica de tecido. A desregulação da expressão de VSTM2L tem sido explorada como uma característica molecular em contextos de pesquisa neurológica e neuropsiquiátrica e em estudos mais amplos de assinaturas transcricionais relacionadas ao cérebro.

VSTM2L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VSTM2L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VSTM2L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VSTM2L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VSTM2L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VSTM2L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VSTM2L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VSTM2L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VSTM2L em células tumorais com expressão de VSTM2L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.