VpreB1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423683

Visão geral

Vpreb1 codifica a VpreB1, um componente da cadeia leve substituta que se associa a λ5 (IGLL1) e à cadeia pesada μ das imunoglobulinas para formar o recetor de pré-células B (pre-BCR) durante a fase inicial da linfopoiese B no rato. A sinalização do pre-BCR coordena a progressão do checkpoint das fases pro–B para pre–B ao promover a proliferação, impor a exclusão alélica da cadeia pesada e iniciar a recombinação da cadeia leve por vias que convergem com cinases da família SRC, com a sinalização SYK/BTK e com programas a jusante PI3K–AKT e MAPK. A perturbação deste eixo altera a dinâmica do desenvolvimento das células B, modifica a formação do repertório e pode influenciar a competência imunitária e os mecanismos de tolerância. Como a função do pre-BCR está estreitamente ligada ao controlo de checkpoints do desenvolvimento, o Vpreb1 é frequentemente estudado em modelos de maturação aberrante de células B e de desregulação imunitária relevantes para a investigação hematológica e autoimune.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VpreB1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Vpreb1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Vpreb1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Vpreb1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VpreB1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Vpreb1 para a investigação da sinalização de VpreB1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Vpreb1 críticos para a função VpreB1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Vpreb1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VpreB1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo VpreB1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Vpreb1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VpreB1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR VpreB1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Vpreb1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Vpreb1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.