VIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423677
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- VIP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico VIP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
VIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423677 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Vip codifica el péptido intestinal vasoactivo (VIP), un neuropéptido que señaliza principalmente a través de los GPCR VIPR1 y VIPR2 para estimular la adenilato ciclasa, elevar el AMPc y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB. En el ratón, el VIP contribuye a la comunicación neuroendocrina, a la coordinación del ritmo circadiano dentro del núcleo supraquiasmático y a la regulación del tono del músculo liso, la vasodilatación y la actividad secretora en tejidos periféricos. La señalización mediada por VIP modula la polarización de células inmunitarias y la producción de citocinas, vinculando esta vía con la homeostasis inflamatoria y la función de la barrera mucosa. La desregulación de la señalización VIP/VIPR se ha asociado con respuestas neuroinflamatorias alteradas, fenotipos de motilidad y secreción gastrointestinal, y efectos dependientes del contexto sobre la inmunidad asociada a tumores y rasgos neuroendocrinos en modelos de enfermedad.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO VIP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vip en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vip junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vip tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VIP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vip para la investigación de la señalización de VIP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Vip críticos para la función de VIP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vip para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido VIP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VIP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vip. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VIP (m) y el plásmido HDR VIP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vip para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vip definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.