Plásmido CRISPR de Activación (h) VGLUT2: sc-403888-ACT

SLC17A6 codifica el transportador vesicular de glutamato 2 (VGLUT2), una proteína de la membrana de las vesículas sinápticas que carga glutamato en las vesículas presinápticas para sostener la neurotransmisión excitatoria. Al controlar el contenido de glutamato vesicular y la liberación cuántica, VGLUT2 contribuye a moldear la fuerza sináptica, el desarrollo de los circuitos y la plasticidad dependiente de la actividad en neuronas centrales y periféricas. La función de VGLUT2 se relaciona con el tráfico vesicular, los gradientes electroquímicos de protones establecidos por la V-ATPasa y las vías de señalización glutamatérgica que regulan la excitabilidad neuronal y la sincronización de las redes. Las alteraciones en el manejo del glutamato y en el equilibrio excitatorio/inhibitorio implican a los procesos regulados por SLC17A6 en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como en mecanismos relevantes para el estrés excitotóxico.

VGLUT2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC17A6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VGLUT2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC17A6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC17A6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VGLUT2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC17A6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VGLUT2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VGLUT2 en células tumorales con expresión de SLC17A6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.