Veli2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423668

Visão geral

Lin7b codifica a Veli2, uma proteína de andaime associada à membrana da família MAGUK/LIN7 que ajuda a organizar complexos de polaridade basolateral e a estabilizar o tráfego de proteínas de membrana. A Veli2 participa da montagem de redes de proteínas juncionais e sinápticas por meio de interações com parceiros que contêm domínio PDZ, influenciando a polaridade epitelial, a sinalização neuronal e o transporte vesicular. Em sistemas murinos, a interrupção de complexos associados a LIN7 pode perturbar a adesão célula–célula, a localização de receptores e a organização de sinapses excitatórias, processos frequentemente investigados em modelos de neurodesenvolvimento e de função de barreira. Vias alteradas de polaridade e tráfego são amplamente relevantes para mecanismos subjacentes a fenótipos do desenvolvimento e à desregulação associada a doenças da arquitetura tecidual e da conectividade neuronal.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Veli2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Lin7b em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Lin7b, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Lin7b na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Veli2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Lin7b para a investigação da sinalização de Veli2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Lin7b críticos para a função Veli2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Lin7b para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Veli2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Veli2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Lin7b. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Veli2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Veli2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Lin7b para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Lin7b definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.