Plásmido CRISPR de Activación (h) VDAC3: sc-404240-ACT

VDAC3 (proteína 3 del canal aniónico selectivo dependiente de voltaje) es una porina de la membrana externa mitocondrial que contribuye al intercambio de metabolitos e iones entre el citosol y las mitocondrias, influyendo en la fosforilación oxidativa y la bioenergética celular. Como parte de la familia de canales aniónicos dependientes de voltaje, participa en la regulación de la permeabilidad de la membrana mitocondrial, el equilibrio redox y la comunicación con las vías de señalización apoptótica. VDAC3 se ha relacionado con procesos de control de calidad mitocondrial y con respuestas al estrés oxidativo, con especial relevancia en tejidos con alta demanda energética. La alteración del transporte y la señalización mitocondriales en los que interviene VDAC3 es de interés en estudios sobre neurodegeneración, disfunción cardiometabólica, infertilidad y remodelación metabólica asociada al cáncer.

VDAC3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de VDAC3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

VDAC3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus VDAC3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional VDAC3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de VDAC3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo VDAC3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de VDAC3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía VDAC3 en células tumorales con expresión de VDAC3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.