VAP-A Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403093-NIC

VAPA codifica a VAP-A, uma proteína de membrana ancorada pela extremidade C-terminal e residente no retículo endoplasmático (RE), que organiza sítios de contato de membrana entre o RE e múltiplas organelas. Por meio do seu domínio MSP, a VAP-A interage com proteínas contendo o motivo FFAT para coordenar a transferência de lipídios, o metabolismo de fosfoinositídeos, o tráfego vesicular e a homeostase do RE, com efeitos a jusante em processos como autofagia e sinalização de estresse. Redes de contato do RE dependentes de VAP-A influenciam a distribuição de colesterol e esfingolipídios e sustentam a função da via secretória, ligando alterações em VAPA a fenótipos celulares relevantes para neurodegeneração, desregulação metabólica e estudos de replicação de patógenos. Como uma proteína de suporte (scaffold) em junções interorganelas, a VAP-A é frequentemente utilizada para investigar mecanismos de comunicação entre organelas, fluxo lipídico e proteostase em condições fisiológicas e de estresse.

VAP-A O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus VAPA em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de VAPA. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função VAPA. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com VAPA interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.