UTY Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-416327-ACT

UTY (gene de repetição tetratricopeptídica transcrito de forma ubíqua, ligado ao Y) codifica uma proteína nuclear associada à cromatina, da família KDM6, que participa do controle epigenético de programas de transcrição. Embora sua atividade catalítica de desmetilase seja reduzida em relação aos parálogos, o UTY está implicado na regulação dos estados de metilação da histona H3K27, no remodelamento da cromatina e em redes de expressão gênica do desenvolvimento. Processos de cromatina dependentes de UTY se cruzam com a especificação de linhagens, a diferenciação de células imunes e a manutenção de estados transcricionais em células em proliferação. Alterações na dosagem de UTY ou na regulação ligada ao cromossomo Y têm sido investigadas no contexto de fenótipos moleculares com viés sexual e de desregulação transcricional relevante para doenças, incluindo mudanças epigenômicas associadas ao câncer.

UTY O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UTY sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UTY O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UTY em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UTY, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UTY. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UTY nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UTY no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UTY em células tumorais com expressão de UTY silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.