Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP51 (h): sc-414805

Présentation

USP51 code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui participe à la désubiquitination, une étape régulatrice clé contrôlant la stabilité des protéines, leur localisation et l’intensité des signaux transmis. En inversant la conjugaison de l’ubiquitine, USP51 peut influencer la protéostasie et la dynamique des complexes multiprotéiques, avec des effets en aval sur la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et les voies de signalisation adaptatives au stress. Une activité altérée des désubiquitinases est fréquemment associée à une dérégulation du système ubiquitine–protéasome observée en oncologie et dans d’autres troubles impliquant une instabilité génomique ou une signalisation aberrante. USP51 présente donc un intérêt pour disséquer la régulation des voies dépendantes de l’ubiquitine et identifier des dépendances spécifiques au contexte dans des modèles de cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP51 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène USP51 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du USP51, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert USP51 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP51.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en USP51 pour l'étude de la signalisation de USP51, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de USP51 essentiels à la fonction de USP51
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de USP51 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP51 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le USP51 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus USP51. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP51 plasmide HDR (h) et le USP51 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie USP51 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles USP51 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.