Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP22 (m): sc-432127

Présentation

Usp22 code l’enzyme déubiquitinante USP22, un composant catalytique du complexe coactivateur transcriptionnel SAGA, qui retire l’ubiquitine de l’histone H2B et d’autres substrats afin d’influencer l’accessibilité de la chromatine et les programmes d’expression génique. En régulant l’élongation transcriptionnelle, la progression du cycle cellulaire et les réponses aux dommages de l’ADN, USP22 contribue à coordonner la prolifération, la différenciation et le maintien de l’intégrité du génome. L’activité d’USP22 s’articule avec des voies de contrôle épigénétique et la protéostasie dépendante de l’ubiquitine, modulant des sorties de signalisation spécifiques au contexte, fréquemment altérées dans des états transcriptionnels pertinents pour le cancer. Des signatures d’expression génique associées à USP22 et dérégulées ont été liées à l’agressivité tumorale et à des phénotypes de type « stem », ce qui étaye son intérêt pour des études mécanistiques de la transcription oncogénique et de la plasticité épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP22 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Usp22 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Usp22, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Usp22 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP22.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Usp22 pour l'étude de la signalisation de USP22, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Usp22 essentiels à la fonction de USP22
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Usp22 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le USP22 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Usp22. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP22 plasmide HDR (m) et le USP22 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Usp22 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Usp22 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.