Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Usherin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423630
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Usherin O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico Usherin, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Usherin Anticorpo (G-6): sc-515555
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Usherin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423630 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ush2a codifica a usherina, uma grande proteína transmembranar associada à matriz extracelular, enriquecida no complexo de membrana periciliar de epitélios sensoriais, onde dá suporte à estrutura mecanossensorial e à integridade celular a longo prazo. Em camundongos, a usherina contribui para a organização dos estereocílios e a manutenção dos fotorreceptores ao coordenar complexos proteicos envolvidos em adesão celular, tráfego ciliar e acoplamento ao citoesqueleto. A disfunção de USH2A está fortemente associada à síndrome de Usher tipo II e à retinose pigmentar, vinculando esse gene a vias que regulam a sinalização dependente de cílios e a homeostase de neurônios sensoriais. Assim, modelos de perda de função de Ush2a são usados para investigar o transporte ciliar, a montagem de arcabouços extracelulares e respostas ao estresse relacionadas à degeneração em contextos de retina e ouvido interno.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Usherin (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ush2a em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ush2a, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ush2a na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Usherin.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ush2a para a investigação da sinalização de Usherin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ush2a críticos para a função Usherin
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ush2a para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo Usherin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Usherin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ush2a. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo Usherin Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Usherin (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ush2a para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ush2a definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.