Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UROD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423626
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UROD Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico UROD, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UROD Antibody (C-4): sc-365297
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UROD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423626 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino **Urod** codifica l’uroporfirinogeno decarbossilasi (UROD), un enzima citosolico della via di biosintesi dell’eme che catalizza la decarbossilazione dell’uroporfirinogeno III in coproporfirinogeno III. Questo passaggio sostiene il flusso cellulare dei tetrapirroli e la corretta produzione di eme, necessaria per la respirazione mitocondriale, la funzione dei citocromi e l’omeostasi redox. L’alterazione dell’attività di UROD modifica il metabolismo delle porfirine, favorendo l’accumulo di intermedi porfirinici e le conseguenti risposte da stress ossidativo. I difetti dipendenti da UROD sono rilevanti nelle porfirie e offrono un punto d’ingresso meccanicistico per studiare lo stress metabolico, la regolazione del ferro/eme e la biologia degli epatociti o delle linee eritroidi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UROD (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Urod in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Urod insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Urod a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UROD.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Urod per lo studio della segnalazione di UROD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Urod critici per la funzione di UROD
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Urod per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal UROD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UROD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Urod. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal UROD Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UROD (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Urod per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Urod definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.