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UQCRC1CRISPR激活质粒(h) | sc-404435-ACT | 20 µg | $397.00 |
人类 UQCRC1 基因编码泛醌醇-细胞色素 c 还原酶核心蛋白 1,是线粒体内膜呼吸链复合体 III(细胞色素 bc1)必不可少的结构组成部分。UQCRC1 通过支持电子从泛醌醇向细胞色素 c 的传递并稳定复合体 III 的组装,参与氧化磷酸化、线粒体膜电位的维持以及活性氧(ROS)的调控。复合体 III 功能受扰可导致细胞能量代谢发生偏移,影响细胞对凋亡的易感性,并改变依赖氧化还原状态的信号通路。文献报道中,UQCRC1 表达改变或线粒体复合体 III 功能障碍与线粒体疾病以及更广泛的疾病背景相关,这些疾病通常表现为生物能量学受损和氧化应激增加。
UQCRC1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性UQCRC1的表达。
UQCRC1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的UQCRC1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于UQCRC1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性UQCRC1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的UQCRC1位点,并能够研究内源性位点上依赖于UQCRC1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在UQCRC1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟UQCRC1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。