uPAR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400666-ACT

PLAUR はヒトのウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子受容体（uPAR）をコードする。uPAR は GPI アンカー型の細胞表面受容体で、uPA に結合してプラスミノーゲン活性化を協調させることで、プロテオリシスを局在化させる。uPAR はインテグリン、ビトロネクチン、ならびに LRP1 を含む受容体複合体との相互作用を介して、細胞外マトリックスのリモデリング、細胞接着、走化性、移動を調節し、細胞周囲のプロテアーゼ活性を MAPK/ERK、PI3K/AKT、フォーカルアドヒージョン動態などの細胞骨格・シグナル伝達経路と結び付ける。PLAUR/uPAR の発現変化は、がんの進行、線維化、血管病変などを含む複数の疾患状況において、浸潤性表現型や炎症性リモデリングと関連している。プロテアーゼ駆動性の微小環境変化を制御する因子として、uPAR は転移機構、創傷修復、免疫細胞トラフィッキングの研究で広く解析されている。

uPAR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PLAURの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

uPAR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PLAUR 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPLAUR転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性uPARの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPLAUR遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるuPAR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPLAUR発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるuPAR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。