UMPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423609

概要

Umpsは、ウリジン一リン酸合成酵素（UMPS）をコードしている。UMPSは二機能性酵素であり、オロト酸ホスホリボシルトランスフェラーゼ活性とオロチジン-5′-リン酸脱炭酸酵素活性を介して、デノボのピリミジン生合成の最終段階を触媒し、オロト酸をUMPへと変換する。UMPSは、DNA複製、RNA合成、ならびに細胞周期の進行に必要なヌクレオチドプールの恒常性を支え、ピリミジン代謝を増殖能およびゲノム安定性と結び付けている。UMPS機能の攪乱は、ヌクレオチド需要の変化を介して一炭素代謝や葉酸共役代謝ネットワークに間接的な影響を及ぼし、複製ストレスに対する細胞応答を再構成し得る。ピリミジン合成経路の制御異常は、マウスモデルを含む哺乳類システムにおける代謝性疾患の機序や増殖表現型の研究に広く関連する。

UMPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるUmps遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Umps内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Umpsのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UMPSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UMPSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Umps欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UMPSの機能に不可欠なUmpsエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Umpsゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UMPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUMPS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Umps遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UMPS HDRプラスミド（m）および UMPS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUmpsホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUmps標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。