ULK2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402558-ACT

ULK2（UNC-51 like autophagy activating kinase 2）は、栄養状態やエネルギー状態のシグナルに応答してオートファゴソーム形成の初期過程を制御し、マクロオートファジーの開始に中心的に働くセリン／スレオニンキナーゼをコードします。ULK2はULK複合体の一員として機能し、mTORC1およびAMPKシグナル伝達からの上流入力を統合して、代謝ストレスとオートファジーフラックスを結び付けるリン酸化イベントを調節します。タンパク質恒常性（プロテオスタシス）、オルガネラの品質管理、飢餓に対する細胞適応に関与することを通じて、ULK2はミトコンドリア恒常性やストレス耐性などのプロセスにも影響を及ぼします。ULK2に関連するオートファジープログラムの制御異常は、神経変性、がん細胞代謝、炎症性シグナル伝達といった文脈で研究されています。

ULK2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ULK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ULK2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ULK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はULK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ULK2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のULK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるULK2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびULK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるULK2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。