Plásmido Doble Nickase (m) ULK1: sc-423606-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)ULK1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ULK1 (m) y el plásmido de doble nickasa ULK1 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ulk1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ULK1 Anticuerpo (F-4): sc-390904
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) ULK1 | sc-423606-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) ULK1 | sc-423606-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen murino **Ulk1** codifica **ULK1**, una quinasa de serina/treonina que actúa como iniciador central de la macroautofagia al integrar señales del estado nutricional y energético. ULK1 forma un complejo de iniciación con **ATG13**, **FIP200/RB1CC1** y **ATG101**, y está regulada por **AMPK** y **mTORC1** para controlar la biogénesis de autofagosomas durante la inanición y el estrés celular. Mediante la fosforilación de factores de autofagia aguas abajo, ULK1 coordina el reclutamiento de membranas y la señalización autofágica temprana, lo que influye en la proteostasis, el control de calidad mitocondrial y las respuestas inmunitarias innatas. La autofagia dependiente de ULK1 desregulada se ha vinculado con neurodegeneración, biología de infecciones, disfunción metabólica y adaptación al estrés asociada al cáncer, lo que convierte a **Ulk1** en un objetivo frecuente en estudios de disección de vías.
ULK1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ulk1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ulk1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ulk1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ulk1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.