ULBP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403663-ACT

ULBP2 (proteína de ligação a UL16 2) é um ligante de NKG2D induzível por estresse, ancorado por GPI, que promove a vigilância imunológica ao se ligar ao NKG2D em células NK e linfócitos T citotóxicos. Sua expressão é modulada por programas de estresse celular, como respostas a dano no DNA, sinalização oncogênica e estímulos inflamatórios, conectando a ULBP2 a vias que controlam a imunogenicidade na superfície celular e o reconhecimento citolítico. Expressão desregulada e shedding (liberação/descamamento) de ULBP2 foram relatados em múltiplas neoplasias e em contextos de inflamação crônica e infecção, nos quais pode influenciar a evasão imune e os limiares de ativação de células imunes. Assim, a ULBP2 é amplamente estudada como um indicador funcional de estresse celular, de interações entre tumor e sistema imune e de mecanismos que regulam a sinalização do eixo NKG2D.

ULBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ULBP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ULBP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ULBP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ULBP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ULBP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ULBP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ULBP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ULBP2 em células tumorais com expressão de ULBP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.