UGTREL1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411438-ACT

SLC35B1 は、ヒトのヌクレオチド糖トランスポーター UGTREL1 をコードする遺伝子であり、UGTREL1 は複数回膜貫通型の膜タンパク質です。小胞体および／またはゴルジ体の内腔側へ活性化糖を供給することで糖鎖付加（グリコシル化）を支えます。UGTREL1 は、糖転移酵素の基質利用可能性を調節することにより、タンパク質の N 型糖鎖付加、品質管理、輸送に影響を与え、その結果として受容体の成熟や分泌経路の恒常性にも波及効果をもたらします。ヌクレオチド糖輸送が乱れると、細胞表面の糖鎖が再構築され、シグナル伝達、接着、ストレス応答が変化し得るため、SLC35B1 は疾患関連の細胞状態における糖タンパク質恒常性（glycoproteostasis）や経路再配線の研究において重要です。そのため SLC35B1 は、代謝—分泌連関、オルガネラ機能、ならびに免疫経路や増殖因子経路における糖鎖依存的な制御という文脈で、しばしば研究対象となっています。

UGTREL1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC35B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UGTREL1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC35B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC35B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UGTREL1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC35B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUGTREL1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC35B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUGTREL1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。