UGT8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-423604-KO-2

概要

Ugt8a は、UDP-ガラクトース：セラミド ガラクトシルトランスフェラーゼ（UGT8）をコードしており、UGT8 はゴルジ体に局在する糖転移酵素として、スルファチドやその他のガラクト脂質の主要な前駆体であるガラクトシルセラミドの生成を触媒します。この酵素反応段階はスフィンゴ脂質およびミエリン脂質の生合成を支え、マウス神経系における膜マイクロドメインの組成、軸索—グリア相互作用、ならびにオリゴデンドロサイトの成熟に影響を与えます。ガラクト脂質バランスの変化は、ミエリン形成の異常や神経炎症性の表現型と関連づけられており、UGT8 は脂質駆動型の神経・グリア生物学を研究するうえで重要な結節点となります。UGT8 活性はまた、発生過程やストレス条件下におけるセラミドフラックス全体や糖スフィンゴ脂質経路のリモデリングを解析する目的でも用いられます。

UGT8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるUgt8a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ugt8a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ugt8aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、UGT8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、UGT8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ugt8a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• UGT8の機能に不可欠なUgt8aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ugt8aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• UGT8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびUGT8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ugt8a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  UGT8 HDRプラスミド（m）および UGT8 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはUgt8aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のUgt8a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。