Plásmido CRISPR de Activación (h) UGT2B7: sc-404209-ACT

UGT2B7 codifica una UDP‑glucuronosiltransferasa humana que cataliza la glucuronidación de diversos sustratos endógenos y xenobióticos, aumentando su solubilidad en agua para favorecer su eliminación celular. Esta actividad de conjugación de fase II se integra con las redes de metabolismo de fármacos hepáticas y extrahepáticas y se coordina con procesos de exportación mediados por transportadores en las vías de desintoxicación. Las variaciones en la expresión o la actividad de UGT2B7 se asocian con diferencias interindividuales en la capacidad metabólica, lo que influye en la exposición celular a compuestos lipofílicos bioactivos y en las respuestas al estrés oxidativo. Como nodo clave en la conjugación de glucurónidos, UGT2B7 se investiga con frecuencia en farmacogenómica, toxicología y modelos de enfermedad centrados en el metabolismo, donde una conjugación alterada afecta la señalización celular y la homeostasis.

UGT2B7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de UGT2B7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

UGT2B7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus UGT2B7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional UGT2B7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de UGT2B7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo UGT2B7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de UGT2B7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía UGT2B7 en células tumorales con expresión de UGT2B7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.