UDP-GlcDH Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405002-ACT

UGDH codifica a UDP-glicose 6-desidrogenase (UDP-GlcDH), uma oxidorredutase citosólica que catalisa a conversão de UDP-glicose em UDP-ácido glicurônico, um importante nucleotídeo de açúcar ativado essencial para a biossíntese de glicosaminoglicanos e proteoglicanos. Ao fornecer UDP-ácido glicurônico, a UDP-GlcDH sustenta a montagem da matriz extracelular, programas de adesão e migração celular e um metabolismo mais amplo de glicoconjugados que influencia a sinalização por receptores e o remodelamento tecidual. Alterações na atividade de UGDH têm sido associadas a mudanças na composição do hialuronano e de outros glicosaminoglicanos, com associações relatadas à invasividade de células tumorais, ao remodelamento de matriz relacionado à fibrose e à dinâmica do microambiente inflamatório. Como um regulador-chave (“gatekeeper”) das interconversões de UDP-açúcares, UGDH é frequentemente estudado em vias que conectam a disponibilidade de nucleotídeos de açúcar à mecanotransdução e às transições epitélio–mesênquima.

UDP-GlcDH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGDH sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UDP-GlcDH O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGDH em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGDH, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UDP-GlcDH. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGDH nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UDP-GlcDH no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UDP-GlcDH em células tumorais com expressão de UGDH silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.