UCP2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400319-ACT

A UCP2 (proteína desacopladora 2) é um transportador da membrana interna mitocondrial que modula o vazamento de prótons, influenciando a eficiência da fosforilação oxidativa, o potencial de membrana mitocondrial e a produção celular de ATP. Ao ajustar a geração de espécies reativas de oxigênio (ROS) e o estado redox mitocondrial, a UCP2 afeta respostas ao estresse, reprogramação metabólica e vias de sinalização de sobrevivência ligadas à disponibilidade de nutrientes. A atividade da UCP2 interage com vias que regulam a secreção de insulina, a utilização de ácidos graxos, a sinalização do inflamassoma e o controle de qualidade mitocondrial, tornando-a relevante para estudos de disfunção metabólica, inflamação e bioenergética de células tumorais. A expressão desregulada de UCP2 tem sido associada a alterações no manejo do estresse oxidativo e no metabolismo mitocondrial em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico em pesquisas mitocondriais e imunometabólicas.

UCP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UCP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UCP2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UCP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UCP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UCP2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UCP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UCP2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UCP2 em células tumorais com expressão de UCP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.