UCP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400410-ACT

A UCP1 (proteína desacopladora 1) é um transportador de prótons da membrana interna mitocondrial que dissipa a força protomotriz para desacoplar a fosforilação oxidativa da síntese de ATP, aumentando o gasto energético sob a forma de calor. Em humanos, a UCP1 é um componente definidor dos programas termogénicos de adipócitos castanhos e bege e influencia a respiração mitocondrial, a oxidação de ácidos gordos e o controlo de espécies reativas de oxigénio. O seu controlo transcricional integra a sinalização adrenérgica, vias de coativação PPAR/PGC-1α e respostas mais amplas ao stress metabólico que regulam a remodelação do tecido adiposo. Alterações na expressão e na atividade de UCP1 são frequentemente estudadas no contexto da obesidade, resistência à insulina e fenótipos cardiometabólicos, nos quais a capacidade termogénica e a função mitocondrial são variáveis-chave.

UCP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UCP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UCP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UCP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UCP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UCP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UCP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UCP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UCP1 em células tumorais com expressão de UCP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.