Ubr1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403943-ACT

ヒトUBR1はE3ユビキチンリガーゼであるUbr1をコードしており、N末端デグロンをユビキチン依存的なプロテアソーム分解へと結び付けるN-end rule経路の、重要な認識コンポーネントです。Ubr1は、ミスフォールドタンパク質、損傷タンパク質、あるいは制御タンパク質の安定性を制御することで、細胞質のタンパク質品質管理、ストレス適応、ならびにユビキチン–プロテアソーム系と交差するより広範なプロテオスタシスネットワークに寄与します。UBR1活性は、基質の制御された分解を通じて細胞恒常性に影響を与え、シグナル伝達のダイナミクスや代謝応答にも作用します。UBR1の遺伝学的な攪乱は遺伝性疾患の表現型と関連しており、ヒト細胞におけるプロテオスタシス破綻の機構や、遺伝子型–表現型の関係を研究するうえでの重要性を裏付けています。

Ubr1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Ubr1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Ubr1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUbr1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUbr1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。