UBE2G2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404851-NIC

UBE2G2 は、E3 リガーゼと協調してユビキチン鎖の形成を担い、プロテアソーム依存的なタンパク質分解回転を制御する E2 ユビキチン結合酵素をコードします。細胞質小胞体関連分解（ERAD）の主要構成要素であり、誤折りたたみタンパク質や過剰タンパク質の除去を支えることで、細胞ストレス下におけるプロテオスタシスの維持に寄与します。ユビキチン化依存的に基質の安定性を制御することを通じて、UBE2G2 は小胞体ストレス応答（UPR）、細胞周期制御、シグナル伝達の強度調節に関連する経路に影響を与えます。ユビキチン–プロテアソーム系および ERAD 活性の破綻は、がん、神経変性、免疫シグナルの異常と関連づけられており、UBE2G2 はタンパク質品質管理の作用機序研究に有用な結節点となります。

UBE2G2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における UBE2G2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、UBE2G2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、UBE2G2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、UBE2G2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。