UBC13 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417204-ACT

ヒトUBE2Nは、E2ユビキチン結合酵素UBC13をコードしており、非分解性のシグナル伝達出力を規定するLys63結合型ポリユビキチン化の中核触媒です。UBE2V1/UBE2V2などのUEV共因子と複合体を形成することで、UBC13はK63ユビキチン鎖の構築を促進し、DNA損傷応答、複製ストレス耐性、自然免疫シグナル伝達の制御に関与します。この活性は、TNFRやトール様受容体（TLR）などの受容体下流におけるNF-κBやMAPKを含む経路の活性化に不可欠であり、プロテアソーム分解よりもタンパク質複合体の動態に影響を与えます。UBE2N/UBC13依存的なユビキチンシグナル伝達の破綻は、炎症状態の変化、ゲノム安定性の欠陥、がん化に関連する経路の再配線に関与するとされており、がん生物学および免疫学における機構研究の観点から重要です。

UBC13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UBE2Nの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

UBC13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UBE2N 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUBE2N転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性UBC13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUBE2N遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるUBC13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUBE2N発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるUBC13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。