Twinkle Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-432601

Visão geral

O gene **Twnk** de camundongo codifica a helicase de DNA mitocondrial **Twinkle**, uma enzima codificada no núcleo que desenrola o mtDNA durante a replicação e dá suporte à manutenção do número de cópias do genoma mitocondrial. A Twinkle atua no replissomo mitocondrial em conjunto com **POLG** e **mtSSB**, coordenando o avanço da forquilha de replicação, a dinâmica do **D-loop** e a biogênese mitocondrial como um todo. A perturbação dessa via compromete a capacidade de fosforilação oxidativa, altera a organização dos nucleoides mitocondriais e pode desencadear respostas compensatórias ao estresse que remodelam o metabolismo celular. A disfunção de **TWNK** está associada à depleção de mtDNA e a múltiplos fenótipos de doenças mitocondriais, tornando **Twnk** um locus-chave para modelar a instabilidade do genoma mitocondrial em pesquisa biomédica.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Twinkle (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Twnk em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Twnk, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Twnk na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Twinkle.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Twnk para a investigação da sinalização de Twinkle, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Twnk críticos para a função Twinkle
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Twnk para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Twinkle Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Twinkle Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Twnk. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Twinkle Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Twinkle (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Twnk para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Twnk definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.