TWEAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401202

概要

TNFSF12はサイトカインTWEAK（TNF-like weak inducer of apoptosis）をコードしており、TWEAKは可溶性リガンドとして放出され得るII型膜貫通タンパク質です。主にFN14/TNFRSF12A受容体を介してシグナルを伝達します。TWEAK–FN14の結合はNF-κBおよびMAPK経路の活性を調節し、細胞の生存、増殖、遊走、分化、ならびに炎症関連遺伝子発現に影響を及ぼし、アポトーシスや組織リモデリングには状況依存的な作用を示します。この軸は、損傷またはストレス下にある組織における血管新生および線維化プログラムの制御、さらに免疫細胞のリクルートやサイトカインネットワークの調整にも関与しています。TWEAK/FN14シグナルの異常は、炎症性および自己免疫性の病態、神経炎症過程、腫瘍微小環境のリモデリングと関連づけられており、免疫学およびがん生物学における機序解明研究を支持する知見となっています。

TWEAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTNFSF12遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TNFSF12内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TNFSF12のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TWEAKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TWEAKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TNFSF12欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TWEAKの機能に不可欠なTNFSF12エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TNFSF12ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TWEAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTWEAK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TNFSF12遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TWEAK HDRプラスミド（h）および TWEAK HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTNFSF12ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTNFSF12標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。