tuberin Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423523-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- tuberinO plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase tuberin (m) e o Plasmídeo Double Nickase tuberin (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Tsc2. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:tuberin Anticorpo (E-9): sc-365103
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
tuberin Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-423523-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
tuberin Plasmídeo duplo de Nickase (m2) | sc-423523-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O Tsc2 de camundongo codifica a tuberina, um supressor tumoral que forma um complexo com a hamartina (TSC1) para atuar como uma GAP para Rheb e conter a sinalização de mTORC1. Ao integrar sinais de fatores de crescimento, energia e nutrientes, a tuberina regula a síntese proteica, a autofagia, o controle do tamanho celular e a homeostase metabólica. A disrupção de Tsc2 leva à hiperativação da sinalização de mTOR e a programas alterados de proliferação e diferenciação celulares. A disfunção de Tsc2 está ligada à biologia do complexo de esclerose tuberosa e é amplamente utilizada para modelar fenótipos de neurodesenvolvimento e semelhantes a neoplasias impulsionados por mTOR em sistemas experimentais.
tuberin O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Tsc2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Tsc2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Tsc2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Tsc2 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.