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TTYH1CRISPR激活质粒(h) | sc-408039-ACT | 20 µg | $397.00 |
TTYH1(tweety family member 1)编码一种多次跨膜蛋白,在神经系统中富集,并被认为参与调控离子稳态、膜兴奋性以及细胞体积动态变化。TTYH1 与多种过程相关,包括钙激活信号传导、与氯离子电导相关的反应,以及影响细胞迁移和神经突起生长的细胞骨架重塑。在细胞模型中,TTYH1 表达的改变可影响细胞增殖和侵袭性行为,这与其在神经发育生物学以及脑肿瘤相关转录程序中的已报道关联相一致。这些特征使 TTYH1 成为研究人类细胞中膜相关信号传导与微环境适应通路的一个重要节点。
TTYH1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TTYH1的表达。
TTYH1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TTYH1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TTYH1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性TTYH1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TTYH1位点,并能够研究内源性位点上依赖于TTYH1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TTYH1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟TTYH1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。