TTP-α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-411045-ACT

O TTPA codifica a proteína de transferência de α‑tocoferol (TTP‑α), uma proteína citosólica de ligação a lipídios que trafega seletivamente o α‑tocoferol (vitamina E) para sustentar a defesa antioxidante celular e a integridade das membranas. Ao regular a distribuição intracelular de vitamina E, a TTP‑α influencia a homeostase redox, a suscetibilidade à peroxidação lipídica e a sinalização responsiva ao estresse ligada à função mitocondrial e do retículo endoplasmático. Alterações na atividade de TTPA estão associadas a fenótipos neurodegenerativos e à vulnerabilidade tecidual relacionada ao estresse oxidativo, refletindo a importância do manejo do α‑tocoferol em células de vida longa e metabolicamente ativas. Assim, a regulação de TTPA em humanos é relevante para estudos de metabolismo lipídico, lesão oxidativa e relações genótipo–fenótipo em modelos neuronais e hepáticos.

TTP-α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TTPA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTP-α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TTPA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TTPA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTP-α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TTPA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTP-α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTP-α em células tumorais com expressão de TTPA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.