TTC36 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431423-ACT

O gene Ttc36 de camundongo codifica a TTC36, uma proteína contendo repetições tetratricopeptídicas (TPR), prevista para atuar como uma plataforma (scaffold) para complexos multiproteicos que coordenam interações proteína–proteína. Proteínas com domínio TPR comumente influenciam a proteostase, o tráfego intracelular e a sinalização ao modular o recrutamento de chaperonas e a montagem de complexos regulatórios. Embora a TTC36 ainda não esteja totalmente caracterizada, estudos baseados em expressão e genética podem esclarecer sua contribuição para programas de controle do estado celular, como resposta ao estresse, diferenciação e homeostase tecidual. A desregulação da formação de complexos mediada por TPR é frequentemente implicada em fenótipos associados a doenças, tornando o Ttc36 um alvo útil para exploração mecanística em modelos murinos.

TTC36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ttc36 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTC36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ttc36 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ttc36, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTC36. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ttc36 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTC36 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTC36 em células tumorais com expressão de Ttc36 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.