TTC36 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-431423-ACT

マウスTtc36は、テトラトリコペプチドリピート（TPR）を含むタンパク質TTC36をコードしており、タンパク質間相互作用を協調させる多タンパク質複合体の足場（スキャフォールド）として機能すると予測されています。TPRドメインタンパク質は一般に、シャペロンとの結合や制御複合体の組み立てを調節することで、プロテオスタシス、細胞内輸送、シグナル伝達に影響を与えます。TTC36はまだ十分に特性解析されていませんが、発現解析および遺伝学的手法に基づく研究により、ストレス応答、分化、組織恒常性といった細胞状態制御プログラムへの寄与を明らかにできます。TPRを介した複合体形成の破綻はしばしば疾患関連表現型に関与するため、Ttc36はマウスモデルにおける機構解明の探索対象として有用です。

TTC36 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Ttc36の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TTC36 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Ttc36 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTtc36転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TTC36の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTtc36遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTTC36依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTtc36発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTTC36経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。