TTC36 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-414529-ACT

O gene humano **TTC36** codifica uma proteína contendo repetições de tetratricopeptídeos (TPR), prevista para atuar como uma plataforma (“scaffold”) de interação proteína–proteína que pode modular a montagem ou a estabilidade de complexos multiproteicos. Proteínas TPR comumente influenciam a sinalização intracelular, o tráfego de proteínas e vias de controle de qualidade ao coordenar interações com chaperonas e a localização subcelular. Embora o **TTC36** permaneça relativamente pouco estudado, seu padrão de expressão e suas potenciais redes de interação o tornam relevante para investigar a regulação dependente do contexto de programas transcricionais e da proteostase em células humanas. Alterações na atividade de processos de scaffold associados a TPR têm sido amplamente relacionadas a desregulação do controle de crescimento e de respostas ao estresse, sustentando o **TTC36** como um alvo útil para pesquisas exploratórias sobre mecanismos de doença.

TTC36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TTC36 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TTC36 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TTC36 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TTC36, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TTC36. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TTC36 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TTC36 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TTC36 em células tumorais com expressão de TTC36 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.