TSPAN7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423425

Übersicht

Tspan7 kodiert das Tetraspanin-Protein TSPAN7, ein mehrfach transmembranöses Gerüstprotein, das tetraspaninangereicherte Mikrodomänen organisiert und die Verteilung sowie Signalübertragung von Partnerrezeptoren an der Zelloberfläche moduliert. Bei der Maus ist TSPAN7 an Membrantransport, zytoskelettalem Umbau und Zell-Zell-Kommunikationsprozessen beteiligt, die die neuronale Entwicklung und synaptische Organisation beeinflussen; zudem kann es in anderen Zelltypen Adhäsions- und Motilitätsprogramme mitsteuern. Über Interaktionen, die Rezeptorclusterung und nachgeschaltete Signalwege formen, trägt TSPAN7 zu Signalwegen bei, die mit Endozytose, Aktindynamik und Signaltransduktion an spezialisierten Membrankompartimenten verknüpft sind. Eine dysregulierte Funktion des Tetraspanin-Netzwerks wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und veränderter zellulärer Konnektivität assoziiert, wodurch Tspan7 ein nützlicher Genort für mechanistische Studien zur Biologie von Membran-Mikrodomänen ist.

Das TSPAN7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tspan7-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tspan7-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tspan7 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TSPAN7-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tspan7-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TSPAN7-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tspan7-Exone abzielen, die für die TSPAN7-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tspan7-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TSPAN7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TSPAN7 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tspan7-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TSPAN7 HDR-Plasmid (m) und TSPAN7 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tspan7-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tspan7-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.