TSHβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423526

Descripción general

Tshb codifica la subunidad beta de la hormona estimulante de la tiroides (TSHβ), un componente de una hormona glicoproteica hipofisaria que confiere especificidad de receptor a la señalización de TSH en la glándula tiroides. En los tirotrofos, la expresión de Tshb está controlada por la hormona liberadora de tirotropina del hipotálamo y por la retroalimentación negativa de las hormonas tiroideas, integrando la homeostasis endocrina con los programas transcripcionales que regulan la diferenciación hipofisaria y la producción hormonal. La activación del receptor de TSH impulsada por TSHβ promueve la biosíntesis de hormonas tiroideas y la regulación metabólica sistémica, vinculando este eje con procesos como el crecimiento, el equilibrio energético y la termogénesis. La desregulación de Tshb y de la retroalimentación hipotálamo–hipófisis–tiroides aguas arriba es relevante en modelos experimentales de disfunción central del eje tiroideo y en fenotipos endocrinos que afectan al desarrollo y al metabolismo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TSHβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tshb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tshb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tshb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TSHβ.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tshb para la investigación de la señalización de TSHβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tshb críticos para la función de TSHβ
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tshb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TSHβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TSHβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tshb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TSHβ (m) y el plásmido HDR TSHβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tshb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tshb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.