TrxR2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402671-ACT

O TXNRD2 humano codifica a tioredoxina redutase mitocondrial 2 (TrxR2), uma selenoenzima que mantém a tioredoxina-2 no seu estado reduzido para sustentar a homeostase redox mitocondrial. A TrxR2 integra a defesa antioxidante dependente de NADPH com o controlo de espécies reativas de oxigénio, do estado dos tióis proteicos mitocondriais e da sinalização sensível ao estado redox, que influencia a apoptose e a adaptação metabólica. Através do seu papel nos sistemas de tioredoxina e peroxirredoxina, o TXNRD2 contribui para a integridade da fosforilação oxidativa e para as respostas celulares ao stress oxidativo. A desregulação do controlo redox mitocondrial envolvendo o TXNRD2 tem sido associada a contextos de metabolismo alterado, neurodegeneração e biologia do cancro, o que tem motivado estudos mecanísticos de fenótipos dependentes do estado redox.

TrxR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TXNRD2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TrxR2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TXNRD2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TXNRD2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TrxR2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TXNRD2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TrxR2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TrxR2 em células tumorais com expressão de TXNRD2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.