Troponin C Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403315-ACT

O TNNC2 humano codifica a troponina C, uma subunidade regulatória ligante de Ca2+ do complexo da troponina que controla as interações actina–miosina no músculo estriado. Ao detetar transientes de cálcio citosólico por meio de motivos do tipo EF-hand, a troponina C promove alterações conformacionais no filamento fino que coordenam o acoplamento excitação–contração e a geração de força no sarcómero. A sinalização de cálcio dependente de TNNC2 integra-se com a montagem das miofibrilas e a especialização funcional das fibras musculares, influenciando a cinética contrátil no músculo de contração rápida. Alterações na responsividade ao cálcio mediada pela troponina e na regulação sarcomérica são relevantes para estudos de fraqueza muscular, miopatias e fenótipos mais amplos de disfunção do músculo esquelético.

Troponin C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNNC2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Troponin C O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNNC2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNNC2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Troponin C. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNNC2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Troponin C no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Troponin C em células tumorais com expressão de TNNC2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.