Plásmido CRISPR de Activación (h) TrkB: sc-400142-ACT

NTRK2 codifica la tirosina quinasa receptora humana TrkB, un receptor de alta afinidad para el BDNF y otras neurotrofinas relacionadas que regula la diferenciación neuronal, la plasticidad sináptica y la supervivencia. Tras la unión del ligando, TrkB activa las cascadas de señalización PI3K–AKT, MAPK/ERK y PLCγ, que coordinan programas transcripcionales, la remodelación del citoesqueleto y la conectividad dependiente de la actividad. La señalización de TrkB es fundamental para el neurodesarrollo y el mantenimiento de los circuitos, y la desregulación de la expresión de NTRK2 o del acoplamiento de sus vías se ha vinculado con alteraciones de la función neuronal en contextos de enfermedades neuropsiquiátricas y neurodegenerativas. Como receptor nodal en las vías de las neurotrofinas, NTRK2 se estudia con frecuencia por sus efectos sobre las transiciones de estado celular, las respuestas al estrés y la expresión génica inducida por estímulos.

TrkB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NTRK2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TrkB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NTRK2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NTRK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TrkB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NTRK2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TrkB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TrkB en células tumorales con expresión de NTRK2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.