TRIM72 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403554-ACT

TRIM72 (também conhecida como MG53) é uma ligase E3 de ubiquitina do tipo “tripartite motif” (TRIM) enriquecida em músculo, que coordena o reparo da membrana plasmática ao detectar a disrupção da membrana e promover o rápido recrutamento de vesículas para os locais de lesão. Em células humanas, a TRIM72 modula a homeostase proteica por meio da degradação dependente de ubiquitina e participa de sinalização de resposta ao estresse associada à remodelação do citoesqueleto e ao tráfego de membranas. Esses processos se cruzam com vias que controlam a integridade das miofibras, o manejo de cálcio e a sinalização inflamatória após lesão celular. A atividade desregulada da TRIM72 tem sido associada a reparo de membrana prejudicado e patologia muscular, reforçando sua relevância em estudos de miopatias, estresse cardiometabólico e respostas a danos teciduais.

TRIM72 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRIM72 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRIM72 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRIM72 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRIM72, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRIM72. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRIM72 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRIM72 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRIM72 em células tumorais com expressão de TRIM72 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.