TRIM5α CRISPR Activationプラスミド (h): sc-409348-ACT

TRIM5α（tripartite motif-containing 5 alpha）は、インターフェロンによって誘導される制限因子であり、レトロウイルスのカプシドを認識して、早期の脱殻（uncoating）を引き起こすとともに、その後段階で逆転写を阻害することにより感染を阻止します。RING–B-box–コイルドコイルからなる構造をもつE3ユビキチンリガーゼであり、さらにカプシド結合性のPRY/SPRYドメインを備えるTRIM5αは、パターン認識をユビキチン依存的なシグナル伝達およびプロテオスタシス（タンパク質恒常性）と結び付け、NF-κBや炎症性サイトカイン応答などの自然免疫経路と交差します。TRIM5の変異は宿主域やレトロウイルスに対する感受性に影響するため、抗ウイルス防御、免疫調節、宿主—病原体共進化における重要な研究対象として広く解析されています。さらに、TRIMファミリータンパク質が関与する自然免疫センシングやユビキチンシグナルの破綻は、免疫介在性の病態や細胞ストレス応答とも関連します。

TRIM5α CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIM5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRIM5α CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRIM5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIM5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRIM5αの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIM5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRIM5α依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIM5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRIM5α経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。