TRIM14 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-405847-ACT-2

ヒトTRIM14（tripartite motif-containing 14）は、自然免疫の制御に関与する細胞質性のTRIMファミリーアダプターをコードしており、パターン認識受容体（PRR）下流でI型インターフェロン誘導や炎症性転写プログラムを調節するシグナル伝達複合体の足場（スキャフォールド）として機能する。TRIM14は、ユビキチン依存的なシグナル伝播や、cGAS–STING、MAVS、NF-κB関連因子などの主要メディエーターの安定性・活性に影響を与えることで抗ウイルス防御経路に関与し、サイトカイン産生とインターフェロン刺激遺伝子（ISG）発現を形成する。TRIM14シグナルの破綻は、宿主—病原体応答の変容や、慢性炎症、がんにおける免疫回避に関連する状況を含む免疫関連の病態生理と結び付けられている。TRIM14の遺伝子編集や機能ゲノミクスのツールは、ヒト細胞におけるPRRシグナル、ユビキチン経路のクロストーク、ならびにインターフェロン駆動性の転写ネットワークの機構解析を支える。

TRIM14 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRIM14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRIM14 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における TRIM14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRIM14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRIM14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRIM14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRIM14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRIM14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRIM14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。