Plásmido Doble Nickase (m) Triadin: sc-429407-NIC

Trdn codifica la triadina, una proteína de membrana del retículo sarcoplásmico de las uniones que organiza el acoplamiento excitación–contracción en el músculo estriado al enlazar el complejo del receptor de rianodina con proteínas luminales que se unen al Ca²⁺, como la calsequestrina. En cardiomiocitos y miofibras esqueléticas de ratón, la triadina ayuda a ajustar la cinética de liberación y recaptación intracelular de Ca²⁺, que determina la fuerza contráctil, la refractariedad y la señalización de la homeostasis del Ca²⁺. A través de su función en la arquitectura de microdominios del retículo sarcoplásmico, la triadina influye en vías dependientes de Ca²⁺ que regulan el desarrollo muscular, las respuestas al estrés y la estabilidad electrofisiológica. La alteración de la función de TRDN se asocia con fenotipos de arritmias hereditarias y rasgos miopáticos, lo que convierte a Trdn en una diana relevante para modelar defectos en el manejo de Ca²⁺ y la remodelación del retículo sarcoplásmico.

Triadin El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Trdn en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Trdn. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Trdn. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Trdn alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.